vestimИзвестия Национальной академии наук Беларуси. Серия медицинских наукProceedings of the National Academy of Sciences of Belarus, Medical series1814-60232524-2350The Republican Unitary Enterprise Publishing House "Belaruskaya Navuka"vestim-399Research ArticleКЛИНИЧЕСКАЯ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНАCLINICAL AND EXPERIMENTAL MEDICINEСИНТЕЗ РЕКОМБИНАНТНОГО СН2-СН3 УЧАСТКА Fс-ФРАГМЕНТА IgG1 ЧЕЛОВЕКА И ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ МЫШИНЫХ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛSYNTHESIS OF RECOMBINANT POLYPEPTIDE INCLUDING CH2-CH3 DOMAINS OF THE HUMAN IgG1 Fc-FRAGMENT AND ITS USE FOR MOUSE POLYCLONAL ANTIBODY PRODUCTIONТкачевС. В.TkachovS. V.

канд. биол. наук, вед. науч. сотрудник

ул. Филимонова, 23, 220114

Ph. D. (Biol.), Leading researcher

23, Filimonov Str., 220114

pjc40@mail.ruФоминаЕ. Г.FominaE. G.

канд. биол. наук, вед. науч. сотрудник

ул. Филимонова, 23, 220114

Ph. D. (Biol.), Leading researcher

23, Filimonov Str., 220114

feg1@tut.byГригорьеваЕ. Е.GrigorievaE. E.

канд. биол. наук, ст. науч. сотрудник

ул. Филимонова, 23, 220114

Ph. D. (Biol.), Senior researcher

23, Filimonov Str., 220114

grigus@mail.ruСчесленокЕ. П.ScheslenokE. P.

канд. биол. наук, вед. науч. сотрудник

ул. Филимонова, 23, 220114

Ph. D. (Biol.), Leading researcher

23, Filimonov Str., 220114

elena_pavlovna@tut.byСемижонП. А.SemizhonP. A.

канд. биол. наук, заведующий лабораторией

ул. Филимонова, 23, 220114

Ph. D. (Biol.), Head of the Laboratory

23, Filimonov Str., 220114

pavel5555@tut.byШколинаТ. В.ShkolinaT. V.

науч. сотрудник

ул. Филимонова, 23, 220114

Researcher

23, Filimonov Str., 220114

МаханькоО. В.MahankoO. V.

канд. биол. наук, ст. науч. сотрудник

ул. Филимонова, 23, 220114

Ph. D. (Biol.), Senior researcher

23, Filimonov Str., 220114

ВладыкоА. С.VladykoA. S.

д-р мед. наук, профессор, гл. науч. сотрудник

ул. Филимонова, 23, 220114

D. Sc. (Med.), Professor, Chief researcher

23, Filimonov Str., 220114

vladyko@belriem.byРеспубликанский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии, МинскRepublican Research and Practical Center for Epidemiology and Microbiology, Minsk201709122017044147Copyright © Ткачев С.В., Фомина Е.Г., Григорьева Е.Е., Счесленок Е.П., Семижон П.А., Школина Т.В., Маханько О.В., Владыко А.С., 20172017Ткачев С.В., Фомина Е.Г., Григорьева Е.Е., Счесленок Е.П., Семижон П.А., Школина Т.В., Маханько О.В., Владыко А.С.Tkachov S.V., Fomina E.G., Grigorieva E.E., Scheslenok E.P., Semizhon P.A., Shkolina T.V., Mahanko O.V., Vladyko A.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vestimed.belnauka.by/jour/article/view/399

В клетках E. coli синтезирован рекомбинантный белок rFс IgG, представляющий собой СН2 и СН3 домены Fc-фрагмента γ-цепи IgG1 человека. Белок rFс IgG является полидетерминантным антигеном, содержащим линейные эпитопы для антител к IgG человека. Проведена иммунизация мышей белком rFс IgG. Показано, что rFс IgG обладает высокой иммуногенностью для мышей и может быть использован для получения антивидовых поликлональных антител к IgG человека. Обнаружено, что мышиные поликлональные антитела к rFc IgG проявляют слабо выраженную перекрестную реактивность в отношении IgM человека, а кроме того, выявлена высокая вариабельность значений титров антител, полученных от разных животных. Для решения этих проблем предлагается проводить оценку качества материала, полученного в результате каждой иммунизации, и отбирать подходящие образцы антител с учетом их авидности, специфичности и титра. 

The recombinant polypeptide rFс IgG containing the amino acid sequence of the CH2 and CH3 domains of the Fc-fragment of the human IgG γ-chain was produced in Escherichia coli. The polypeptide rFс IgG is an antigen with many linear epitopes for human IgG. Wild-type mice were immunized with rFс IgG to obtain immune ascitic fluids containing polyclonal antibodies against human IgG. It was shown that rFс IgG was highly immunogenic for mice and could be used to produce polyclonal antibodies against human IgG. It was revealed that mouse polyclonal antibodies slightly cross-reacted with human IgM, in addition a high variability of titers of antihuman Ig derived from different mice was found. To solve these problems, it was offered to assess the quality of material obtained after every immunization and to select suitable antibody samples with appropriate avidity, specificity and titer. 

рекомбинантный белокFc-фрагмент иммуноглобулина Gантигенантивидовые поликлональные антителаиммунизация мышейrecombinant proteinFc-fragment of immunoglobulin Gantigenanti-species polyclonal antibodiesimmunization of miceReferencesThe production of polyclonal antibodies in laboratory animal. The report and recommendations of ECVAM workshop 35 / P.P. Leenaars [et al.] // ATLA. – 1999. – Vol. 27, N 1. – P. 79–102.Leenaars M., Hendriksen C. F. M., de Leeuw W. A., Carat F., Delahaut P., Fischer R., Halder M., Hanly W. C., Hartinger J., Hau J., Lindblad E. B., Nicklas W., Outschoorn I. M., Stewart-Tull D.E. S. The production of polyclonal antibodies in laboratory animals. The report and recommendations of ECVAM workshop 35. Alternatives to Laboratory Animals, 1999, vol. 27, no. 1, pp. 79–102. 2. Catty D. Antibodies: a practical approach, vol.Кэтти, Д. Антитела. Методы : пер. с англ. / Д. Кэтти, Ч. Райкундалиа. – М. : Мир, 1991. – Т. 2. – 382 с.Oxford, IRL Press, 1989. 280 p. (Russ. ed.: Ketti D., Raikundalia Ch. Antitela. Metody [Antibodies. Methods], vol. 2. Moscow, Mir Publ., 1991. 382 p.Novotny, J. Location of antigenic epitopes on antibody molecules / J. Novotny, M. Handschumacher, E. Haber // J. Mol. Biol. – 1986. – N 4. – P. 715–721.Novotny J., Handschumacher M., Haber E. Location of antigenic epitopes on antibody molecules. Journal of Molecular Biology, 1986, no. 4, pp. 715–721. DOI: 10.1016/0022–2836(86)90502–4Hajighasemi, F. Production and characterization of mouse monoclonal antibodies recognizing human pan-IgG specific conformational or linear epitopes / F. Hajighasemi, J. Khoshnoodi, F. Shokri // Avicenna J. Med. Biotech. – 2012. – Vol. 4, N 4. – P. 170–177.Hajighasemi F., Khoshnoodi J., Shokri F. Production and characterization of mouse monoclonal antibodies recognizing human pan-IgG specific conformational or linear epitopes. Avicenna Journal of Medical Biotechnology, 2012, vol. 4, no. 4, pp. 170–177.Characterization of epitopes of pan-IgG/anti-G3m(u) and anti-Fc monoclonal antibodies / P. Nelson [et al.] // Immunol. Lett. – 2003. – Vol. 88, N 1. – P. 77–83.Nelson P., Westwood O., Soltys A., Jefferis R., Goodall M., Baumforth K., Frampton G., Tribbick G., Roden D., Hay F. Characterization of epitopes of pan-IgG/anti-G3m(u) and anti-Fc monoclonal antibodies. Immunology Letters, 2003, vol. 88, no. 1, pp. 77–83. DOI: 10.1016/S0165–2478(03)00056–7Characterization of anti-IgG monoclonal antibody A57H by epitope mapping / N. Nelson [et al.] // Biochem. Soc. Transact. – 1997. – Vol. 25, N 2. – P. 373.Nelson N., Westwood O., Jefferis R., Goodall M., Hay F. Characterization of anti-IgG monoclonal antibody A57H by epitope mapping. Biochemical Society Transactions, 1997, vol. 25, no. 2, p. 373.Schroeder Jr., H.W. Immunoglobulins: structure and function / H.W. Schroeder Jr., D. Wald, N.S. Greenspan // Fundamental Immunology / ed. W.E. Paul. – 7rd ed. – Philadelphia : Wolters Kluwer Health ; Lippincott Williams & Wilkins, 2013, XVIII. – 1283 p.Schroeder Jr. H. W., Wald D., Greenspan N. S. Immunoglobulins: structure and function. Fundamental Immunology, 7th ed., in Paul W. E. (ed.). Philadelphia, Wolters Kluwer Health, Lippincott Williams & Wilkins, 2013, XVIII. 1283 p.Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. – 1970. – Vol. 227. – P. 680–685.Laemmli U. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 1970, vol. 227, pp. 680–685. DOI:10.1038/227680a0

The authors declare that there are no conflicts of interest present.