vestimИзвестия Национальной академии наук Беларуси. Серия медицинских наукProceedings of the National Academy of Sciences of Belarus, Medical series1814-60232524-2350The Republican Unitary Enterprise Publishing House "Belaruskaya Navuka"10.29235/1814-6023-2025-22-4-314-323vestim-1057Research ArticleКЛИНИЧЕСКАЯ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНАCLINICAL AND EXPERIMENTAL MEDICINEРазработка метода детекции цоДНК у пациентов с немелкоклеточным раком легкого с использованием маркера метилирования RASSF1Development of a method for detecting ctDNA in patients with non-small cell lung cancer using the RASSF1 methylation markerСмирновС. Ю.SmirnouS. Y.

Смирнов Сергей Юрьевич ‒ биолог

223040, а/г Лесной, Минский р-н

Siarhei Y. Smirnou ‒ biologist

223040, Lesnoy, Minsk region

rustledeath24@gmail.comМедведьА. В.MiadzvedzA. V.

Медведь Антонина Викторовна ‒ врач клинической лабораторной диагностики

223040, а/г Лесной, Минский р-н

Antonina V. Miadzvedz ‒ doctor of clinical laboratory diagnostic

223040, Lesnoy, Minsk region

dr.medvedav@gmail.comПивоварчикС. Н.PivavarchykS. N.

Пивоварчик Сергей Николаевич ‒ врач-онколог

223040, а/г Лесной, Минский р-н

Siarhei N. Pivavarchyk ‒ oncologist

223040, Lesnoy, Minsk region

serginio0290@rambler.ruВахомчикТ. Г.VakhomchykT. G.

Вахомчик Татьяна Георгиевна ‒ врач-радиолог

223040, а/г Лесной, Минский р-н

Tatsiana G. Vakhomchyk ‒ radiologist

223040, Lesnoy, Minsk region

chik-city@tut.byКороткевичП. Е.KaratkevichP. E.

Короткевич Павел Евгеньевич ‒ канд. мед. наук, до- цент, заведующий отделением

223040, а/г Лесной, Минский р-н

Pavel E. Karatkevich ‒ Ph. D. (Med.), Associate Pro- fessor, Head of the Department

223040, Lesnoy, Minsk region

pavelkorotkevich@mail.ruСубочЕ. И.SubachH. I.

Субоч Елена Ивановна ‒ канд. мед. наук, доцент, заведующий отделением

223040, а/г Лесной, Минский р-н

Helen I. Subach ‒ Ph. D. (Med.), Associate Professor, Head of the Department

223040, Lesnoy, Minsk region

helen_suboch@mail.ruПортянкоА. С.PortyankoA. S.

Портянко Анна Сергеевна ‒ д-р мед. наук, профессор, заведующий лабораторией

223040, а/г Лесной, Минский р-н

Anna S. Portyanko ‒ D. Sc. (Med.), Professor, Head of the Laboratory

223040, Lesnoy, Minsk region

a_port@mail.ruРеспубликанский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии имени Н. Н. АлександроваN. N. Alexandrov National Cancer Centre202504122025224314323Copyright © Смирнов С.Ю., Медведь А.В., Пивоварчик С.Н., Вахомчик Т.Г., Короткевич П.Е., Субоч Е.И., Портянко А.С., 20252025Смирнов С.Ю., Медведь А.В., Пивоварчик С.Н., Вахомчик Т.Г., Короткевич П.Е., Субоч Е.И., Портянко А.С.Smirnou S.Y., Miadzvedz A.V., Pivavarchyk S.N., Vakhomchyk T.G., Karatkevich P.E., Subach H.I., Portyanko A.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vestimed.belnauka.by/jour/article/view/1057

Аннотация. На основании информации из международной базы данных The Cancer Genome Atlas оценен статус метилирования промотора гена RASSF1 в 57 образцах опухолевой ткани (аденокарцинома и плоскоклеточный рак) и 27 образцах нормальной ткани легкого. Установлены области промотора, характеризующиеся специфичным профилем метилирования при немелкоклеточном раке легкого, включая его различные гистологические формы.

В рамках проведенного исследования осуществлен дизайн праймеров для метил-специфичной ПЦР, с помощью которой подтверждена возможность использования маркера RASSF1 для детекции опухолевой ДНК. Разработана методика детекции циркулирующей опухолевой ДНК в плазме крови пациентов с немелкоклеточным раком легкого с помощью цифровой капельной ПЦР.

Based on information from the international database The Cancer Genome Atlas, the methylation status of the RASSF1 gene promoter was studied in 57 non-small cell lung cancer tissue samples (adenocarcinoma and squamous cell lung carcinoma) and 27 normal lung tissue samples. Promoter regions characterized by specific methylation profiles in non-sm all cell lung cancer, including various histological types, were identified.

The obtained data was then used to design primers for methylation-specific PCR, thereby confirming the feasibility of using the RASSF1 marker for tumor DNA detection. A methodology for detecting ctDNA in the blood plasma of patients with non-small cell lung cancer was developed using droplet digital PCR.

немелкоклеточный рак легкогоцоДНКRASSF1метилированиецифровая капельная ПЦРnon-small cell lung cancerctDNARASSF1methylationdroplet digital PCRРабота выполнена в рамках гранта БРФФИ М23 РНФ № 131.The work was carried out within the framework of the BRFFR М-23 RSF, grant No. 131.ReferencesMethylation dynamics of RASSF1A and its impact on cancer / G. Malpeli, G. Innamorati, I. Decimo [et al.] // Cancers. – 2019. – Vol. 11, N 7. – Art. 959. https://doi.org/10.3390/cancers11070959Malpeli G., Innamorati G., Decimo I., Bencivenga M., Kamdje A. H. N., Perris R., Bassi C. Methylation dynamics of RASSF1A and its impact on cancer. Cancers, 2019, vol. 11, no. 7, art. 959. https://doi.org/10.3390/cancers11070959RASSF1A, puppeteer of cellular homeostasis, fights tumorigenesis, and metastasis ‒ an updated review / F. Dubois, E. Bergot, G. Zalcman, G. Levallet // Cell Death and Disease. – 2019. – Vol. 10, N 12. – Art. 928. https://doi.org/10.1038/s41419-019-2169-xDubois F., Bergot E., Zalcman G., Levallet G. RASSF1A, puppeteer of cellular homeostasis, fights tumorigenesis, and metastasis ‒ an updated review. Cell Death and Disease, 2019, vol. 10, no. 12, art. 928. https://doi.org/10.1038/s41419-019-2169-xAssociation of RASSF1A promoter methylation with lung cancer risk: a meta-analysis / Y.-Z. Huang, W. Wu, K. Wu [et al.] // Asian Pacific Journal of Cancer Prevention. – 2014. – Vol. 15, N 23. – P. 10325‒10328. https://doi.org/10.7314/apjcp.2014.15.23.10325Huang Y.-Z., Wu W., Wu K., Xu X.-N., Tang W.-R. Association of RASSF1A promoter methylation with lung cancer risk: a meta-analysis. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention, 2014, vol. 15, no. 23, pp. 10325‒10328. https://doi.org/10.7314/apjcp.2014.15.23.10325DNA methylation analysis of the SHOX2 and RASSF1A panel using cell-free DNA in the diagnosis of malignant pleural effusion / N. Zhang, Z. Liu, K. Li [et al.] // Journal of Oncology. – 2023. – Vol. 2023. – Art. 5888844. https://doi.org/10.1155/2023/5888844Zhang N., Liu Z., Li K., Xing X., Long C., Liu F., She B., Che N. DNA methylation analysis of the SHOX2 and RASSF1A panel using cell-free DNA in the diagnosis of malignant pleural effusion. Journal of Oncology, 2023, vol. 2023, art. 5888844. https://doi.org/10.1155/2023/5888844Hypermethylated RASSF1A as circulating tumor DNA marker for disease monitoring in neuroblastoma / L. Zogchel, E. Wezel, J. Wijk [et al.] // JCO Precision Oncology. – 2020. – Vol. 4. – P. 291–306. https://doi.org/10.1200/PO.19.00261Zogchel L., Wezel E., Wijk J., Stutterheim J., Bruins W. S. C., Zappeij-Kannegieter L. [et al.]. Hypermethylated RASSF1A as circulating tumor DNA marker for disease monitoring in neuroblastoma. JCO Precision Oncology, 2020, vol. 4, pp. 291–306. https://doi.org/10.1200/PO.19.00261Prognostic value of RASSF1A methylation status in non-small cell lung cancer (NSCLC) patients: A meta-analysis of prospective studies / H. Hu, Y. Zhou, M. Zhang, R. Ding // Biomarkers. – 2019. – Vol. 24, N 3. – P. 207‒216. https://doi.org/10.1080/1354750X.2019.1583771Hu H., Zhou Y., Zhang M., Ding R. Prognostic value of RASSF1A methylation status in non-small cell lung cancer (NSCLC) patients: A meta-analysis of prospective studies. Biomarkers, 2019, vol. 24, no. 3, рр. 207‒216. https://doi.org/10.1080/1354750X.2019.1583771National Cancer Institute. The Cancer Genome Atlas. URL: https://portal.gdc.cancer.gov (date of access: 12.05.2025).National Cancer Institute. The Cancer Genome Atlas. Available at: https://portal.gdc.cancer.gov (accessed 12.05.2025).TFsitescan. – URL: http://www.ifti.org/cgi-bin/ifti/Tfsitescan.pl (date of access: 12.05.2025).TFsitescan. Available at: http://www.ifti.org/cgi-bin/ifti/Tfsitescan.pl (accessed 12.05.2025).The Li Lab. MethPrimer 2.0. – URL: http://www.urogene.org/cgi-bin/methprimer/methprimer.cgi (date of access: 12.05.2025).The Li Lab. MethPrimer 2.0. Available at: http://www.urogene.org/cgi-bin/methprimer/methprimer.cgi (accessed 12.05.2025).Integrated DNA technologies. OlygoAnalyzer. – URL: https://www.idtdna.com/pages/tools/oligoanalyzer (date of access: 12.05.2025).Integrated DNA technologies. OlygoAnalyzer. Available at: https://www.idtdna.com/pages/tools/oligoanalyzer (accessed 12.05.2025).

The authors declare that there are no conflicts of interest present.